formazan溶解液使用说明书

产品简介：

MTT 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

Formazan溶解液产品原理：

　　噻唑兰（Methylthiazoletetrazolium, MTT）是一种可接受氢离子的淡黄色唑氮盐染料，被活细胞线粒体呼吸链中的琥珀酸脱氢酶和细胞色素C还原，使tetrazolium环开裂，生成深紫色结晶产物甲簪（formazan）。死细胞因丧失琥珀酸脱氢酶活性，因此甲簪的生成量仅与活细胞数目成正比。在特定溶剂存在的情况下，甲簪可以被完全溶解，借助酶标仪测定570nm波长附近的吸光度，可推算出活细胞的数量或细胞存活率。细胞增殖速度越快，则甲簪生成的量越多，吸光度越高；细胞毒性越大，则甲簪生成的量越少，吸光度越低。MTT试验由于操作简便，成本低，不污染环境，克服了传统的同位素掺入或释放实验等操作复杂，成本高，对仪器设备和实验室条件要求高，难于防护等因素，而被广泛地用于细胞增殖和细胞毒性的检测。 但是，由于MTT试验中生成的深紫色结晶产物甲簪（formazan）难溶于水，必需离心后吸除培养液，加入DMSO或异丙醇等有机溶剂溶解后才能进行吸光度检测，在一定程度上限制了MTT试验的应用。

优点：

我公司生产的Formazan溶解液(Formazan Dissolving Solution)可以直接溶解培养液中的甲簪，无需离心吸除培养液，在原有的培养液中直接加Formazan溶解液，轻轻吹打几下就可使细胞板孔中甲瓒（Formazan）全部溶解。故可避免因去除培养液操作中吸除了部分甲簪产物引起的操作误差。因为无需去除培养液而本底值也相对较低。且经Formazan溶解液处理的细胞板平行孔的CV值较低，结果重现性较高。不易产生气泡，减少结果误差。因此本Formazan溶解液具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简便等特点。

使用说明：

1. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。

2. 按照实验需要，进行培养并给予特定的药物刺激。

3. 每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。

 每孔加入100微升Formazan溶解液，用排枪轻轻吹打混匀，使甲簪全部溶解（吹打后如果产生气泡，可室温静置5-10min，气泡将自行消失）

4. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。

注意事项：

1. 由于使用96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。一方面，由于96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

3. 如有沉淀结晶，可于室温条件下摇晃，即可溶解。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。